Niepowtarzalna dysfunkcja inhibitora C1 u krewnego bez obrzęku naczynioruchowego. II. Identyfikacja substytucji Ala443 -> Val i analiza funkcjonalna rekombinowanego zmutowanego białka.

Ustaliliśmy przyczynę niezwykłej anomalii inhibitora C1 w dużej rodzinie. Wcześniej stwierdziliśmy, że połowa cząsteczek inhibitora C1 w surowicy u dotkniętych krewnych członków jest normalna. Druga połowa skompleksowana z C1s, ale wykazała niewielkie tworzenie kompleksów z C1r. Te cząsteczki okazały się również stosunkowo odporne na trawienie trypsyną. Podsumowując, odkrycia sugerują, że członkowie tego pokolenia są heterozygotyczni pod względem nietypowej mutacji inhibitora C1. Sekwencjonowanie genomowego DNA z rodziny pokrewnej ujawniło, że tymina zastąpiła cytozynę w kodonie dla Ala443 (reszta P2) w jednym allelu inhibitora C1, powodując podstawienie resztą Val. Aby przetestować efekt tej substytucji, zmutowany inhibitor C1 zawierający Ala443 -> Val został skonstruowany przez ukierunkowaną mutagenezę i wyrażony w komórkach COS-1. Zarówno mutant Ala443 -> Val, jak i inhibitor C1 typu dzikiego, kompleksowały się całkowicie z C1s, kalikreiną i czynnikiem krzepnięcia XIIa po inkubacji w 37 ° C przez 60 min. Przeciwnie, zmutowany inhibitor nie kompleksował się całkowicie z C1r w tych samych warunkach. Analiza przebiegu w czasie wykazała, że zdolność mutanta do kompleksowania z C1s jest również upośledzona: chociaż kompleksował się całkowicie w 60 min, szybkość tworzenia kompleksu podczas 0-60 minutowej inkubacji była zmniejszona w porównaniu z inhibitorem C1 typu dzikiego. Zmutowany inhibitor tworzył również kompleks z trypsyną, proteazą serynową, która rozszczepia i nie jest hamowana przez inhibitor C1 typu dzikiego. Mutacja Ala443 -> Val zamienia zatem inhibitor C1 z substratu na inhibitor trypsyny. Badania te podkreślają rolę reszty P2 w określaniu swoistości docelowej proteazy.Obrazy
[hasła pokrewne: szpital kościuszki gliwice, badanie węzłów chłonnych, obieg chłodniczy ]
[podobne: endoproteza stawu kolanowego, deklaracja wyboru lekarza poz, dyskopatia rehabilitacja ]
[przypisy: przychodnia sojowa, bobotic ulotka, feminum aktiv ]