Wysokie powinowactwo do receptorów lipoprotein w atypowej dysbetalipoproteinemii (hyperlipoproteinemia typu III).

Rodzinna dysbetalipoproteinemia (lub hiperlipoproteinemia typu III) charakteryzuje się obecnością nieprawidłowych, bogatych w estry cholesterolu beta-bardzo niskiej gęstości lipoprotein (beta-VLDL) w osoczu. Osobnicy z typową dysbetalipoproteinemią są homozygotyczni pod względem podstawienia aminokwasu w apolipoproteinie (apo) E przy reszcie 158 i mają wadliwe wiązanie apo-E zarówno pre-beta-VLDL, jak i beta-VLDL do apo-B, E (LDL) (lub LDL) receptory (1988. Chappell, DA, J. Clin, Invest 82: 628-639). Aby zrozumieć wpływ substytucji w apo-E w miejscach innych niż reszta 158, badano dziewięć osobników z dys-talu-lipoproteinemią (dys-beta), którzy byli homozygotyczni lub heterozygotyczni pod względem substytucji w apo-E w nietypowych miejscach. Continue reading „Wysokie powinowactwo do receptorów lipoprotein w atypowej dysbetalipoproteinemii (hyperlipoproteinemia typu III).”

Hormon stymulujący tarczycę i insulinopodobny czynnik wzrostu-1 synergizują się w celu podniesienia 1,2-diacyloglicerolu w komórkach tarczycy szczura. Stymulacja syntezy DNA poprzez oddziaływanie między systemami transdukcji sygnału lipidów i cyklazy

Hormon tyreotropowy (TSH) i insulinopodobny czynnik wzrostu-1 (IGF-1) synergistycznie stymulują syntezę DNA w komórkach tarczycy. W tym raporcie nowy mechanizm pośredniczenia w tych synergistycznych interakcjach opisano w komórkach tarczycy szczura (FRTL-5). Ponieważ octan mirystynianu forbolu stymuluje syntezę DNA, zmierzono wpływ TSH, IGF-1 i insuliny na zawartość komórek FRTL-5 1,2-diacyloglicerolu (1,2-DG), endogennego aktywatora kinazy białkowej C. Po 6 dniach TSH, IGF-1 i insulina powodowały wzrost poziomu komórkowego 1,2-DG (średnia +/- SE) do 180 +/- 10%, 540 +/- 50% i 360 +/- 40% kontrola, podczas gdy TSH plus IGF-1 i TSH plus insulina synergistycznie zwiększały 1,2-DG do 1890 +/- 310% i 690 +/- 230%, odpowiednio. W przypadku braku insuliny wpływ TSH na podwyższenie poziomu 1,2-DG wykazywał wartość EC50 około 2000 mikroU / ml. Continue reading „Hormon stymulujący tarczycę i insulinopodobny czynnik wzrostu-1 synergizują się w celu podniesienia 1,2-diacyloglicerolu w komórkach tarczycy szczura. Stymulacja syntezy DNA poprzez oddziaływanie między systemami transdukcji sygnału lipidów i cyklazy”

Cyklaza adenylowa i interleukina 6 są dalszymi efektami parathormonu, powodującymi stymulację resorpcji kości.

Parathormon i inne czynniki resorpcyjne kości funkcjonują, przynajmniej częściowo, przez indukowanie osteoblastów do wydzielania cytokin, które stymulują zarówno różnicowanie, jak i resorpcyjną aktywność osteoklastów. Wcześniej zidentyfikowano dwie potencjalnie ważne cytokiny, wykazując, że parathormon indukuje ekspresję osteoblastów IL-6 i czynnik hamujący białaczkę bez wpływu na poziomy 14 innych cytokin. Chociaż parathormon aktywuje szlaki transdukcji wielu sygnałów, indukcja IL-6 i czynnik hamujący białaczkę zależy od aktywacji cyklazy adenylowej. Badanie to pokazuje, że cyklaza adenylowa jest również wymagana do stymulacji aktywności osteoklastów w hodowlach zawierających osteoklasty z kości szczurów o długiej długości i UMR106-01 komórek osteosarcoma podobnych do osteoblastów szczura. Ponieważ stymulacja parathormonem zarówno wytwarzania cytokin, jak i resorpcji kości zależy od tego samego szlaku transdukcji sygnału, postawiliśmy hipotezę, że IL-6 może być dalszym efektorem parathormonu. Continue reading „Cyklaza adenylowa i interleukina 6 są dalszymi efektami parathormonu, powodującymi stymulację resorpcji kości.”

Badania nad toksynogenezą w Vibrio cholerae. III. Charakterystyka mutantów nietoksynogennych in vitro i zwierząt doświadczalnych.

Spontaniczne i chemicznie indukowane mutanty o obniżonej zdolności do wytwarzania enterotoksyny cholery (choleragen) jako białka pozakomórkowego wyizolowano ze szczepów Vibrio cholerae 569B Inaba, klasycznego wirusa cholery i 3083-2 Ogawa, El Vibrio. Dzięki jakościowemu i ilościowemu testowi immunologicznemu in vitro takie mutanty można było rozdzielić na różne klasy charakteryzujące się albo wytwarzaniem niewykrywalnego choleragenu (toksycznego minus), albo niewielkich ilości pozakomórkowego choleragenu, albo dużych ilości związanego z komórką cholestagenem, ale niewielkim zewnątrzkomórkowym choleragenem. . Analiza białek w stężonych supernatantach hodowli za pomocą elektroforezy w żelach poliakrylamidowych wykazała, że w hodowlach z toksycznie ujemnych szczepów brakowało białek z ruchliwością elektroforetyczną odpowiadających choleragenowi lub spontanicznie utworzonym toksoidom (choleragenoid). Noworodki królików zakażonych szczepami toks-ujemnymi pozostawały bezobjawowe lub miały łagodniejsze objawy niż króliki zakażone szczepami toksycznymi + rodzicielskimi. Continue reading „Badania nad toksynogenezą w Vibrio cholerae. III. Charakterystyka mutantów nietoksynogennych in vitro i zwierząt doświadczalnych.”

Stymulacja cGMP monocytów przez dializaty leukocytów. Właściwość niezależnego od antygenu dializowanego czynnika transferu.

Zbadaliśmy wpływ dializatów na lizaty leukocytów zawierające dializowalną aktywność czynnika transferowego i inne dializaty leukocytów pozbawione aktywności czynnika transferu na akumulację cyklicznych nukleotydów w ludzkich leukocytach. Dializaty z normalnych leukocytów wytwarzały 4- do 11-krotny wzrost cGMP leukocytów, a eksperymenty z oczyszczonymi populacjami komórek ujawniły, że wzrosty były głównie, jeśli nie całkowicie, w monocytach krwi. Substancje, które zwiększyły cGMP monocytów można uzyskać z kilku populacji komórek, w tym komórek jednojądrzastych z gradientów Hypaque-Ficoll, monocytów przylegających do plastra, nieprzylegających limfocytów i neutrofili, ale nie były obecne w dializatach limfocytów białaczkowych od pacjentów z zespołem Sezary ego. Co więcej, dializaty, które zwiększały cGMP leukocytów, zasadniczo nie miały wpływu na wewnątrzkomórkowy cAMP. Dializaty zlizowanych komórek jednojądrzastych zawierały serotoninę, askorbinian i niezidentyfikowaną aktywność cholinergiczną, środki zwiększające cGMP leukocytów. Continue reading „Stymulacja cGMP monocytów przez dializaty leukocytów. Właściwość niezależnego od antygenu dializowanego czynnika transferu.”

Przewlekła hiperglikemia jest związana z upośledzonym wpływem glukozy na wydzielanie insuliny. Badanie na normalnych szczurach z zastosowaniem przewlekłych infuzji glukozy in vivo.

Zaproponowaliśmy, aby przewlekła hiperglikemia zmieniała zdolność glukozy do modulowania wydzielania insuliny, i teraz badali wpływ różnych poziomów hiperglikemii na funkcjonowanie komórek B u normalnych szczurów, stosując przewlekłe infuzje glukozy. Szczurom o masie 220-300 g podawano wlew 0,45% NaCl lub 20, 30, 35 lub 50% glukozy w dawce 2 ml / h przez 48 godzin, co zwiększało poziom glukozy w osoczu o 18 mg / dl dla 30% szczurów, 37 mg / dl u 35% szczurów i 224 mg / dl w grupie 50%. Następnie badano wydzielanie insuliny przy użyciu izolowanej perfuzji trzustki in vitro. Wydzielanie insuliny indukowane glukozą pozostawało nienaruszone w normoglikemicznych szczurach z 20% glukozą i było nasilone u szczurów z łagodną hiperglikemią i 30% glukozą. Jednakże, przy jeszcze większej hiperglikemii w grupie 35% glukozy, odpowiedź insulinowa na wysoki perfuzat glukozy była poważnie stępiona i została całkowicie utracona u większości hiperglikemicznych szczurów z 50% glukozą. Continue reading „Przewlekła hiperglikemia jest związana z upośledzonym wpływem glukozy na wydzielanie insuliny. Badanie na normalnych szczurach z zastosowaniem przewlekłych infuzji glukozy in vivo.”

Synteza transferryny przez drobnokomórkowe komórki raka płuca działa jako autokrynny regulator proliferacji komórkowej.

Ponieważ transferyna jest niezbędna do proliferacji komórkowej, badaliśmy syntezę transferryny przez linię komórek drobnokomórkowego raka płuc (NCI-H510), która przeżywa w pożywce bez surowicy bez dodatku transferyny. Testy immunologiczne dla ludzkiej transferryny wykazały, że te komórki zawierają immunoreaktywną ludzką transferynę. Badania immunofluorescencji wykazały, że białko ulega ekspresji na powierzchni komórek, przypuszczalnie wiąże się z receptorem transferyny. Pożywki kondycjonowane przez komórki NCI-H510 wspierają proliferację ludzkich komórek białaczkowych, które nie przeżyłyby w mediach bez transferyny. [35S] Wbudowana metionina dokumentacja syntezy transferryny przez komórki NCI-H510, a także trzy inne małe linie komórkowe. Continue reading „Synteza transferryny przez drobnokomórkowe komórki raka płuca działa jako autokrynny regulator proliferacji komórkowej.”

Przeciwciało monoklonalne do domeny karboksyterminalnej prokolagenu typu I wizualizuje fibroblasty syntetyzujące kolagen. Wykrywanie zmienionego fenotypu fibroblastów w płucach pacjentów ze zwłóknieniem płuc.

Nadmierne odkładanie kolagenu odgrywa kluczową rolę w rozwoju zwłóknienia, a wczesne lub aktywne zwłóknienie może być bardziej podatne na interwencję terapeutyczną niż późniejsze etapy powstawania blizn. Jednakże obecnie nie ma prostej metody oceny aktywności syntezy kolagenu i sekrecji fibroblastów w tkankach ludzkich. Karboksyterminalne domeny prokolonu typu I są usuwane proteolitycznie podczas wydzielania kolagenu. W związku z tym przeciwciała przeciwko tym domenom powinny zabarwić fibroblasty syntetyzujące kolagen typu I, ale nie pozakomórkowe włókienka kolagenowe, które mogłyby maskować sygnał z komórek. Opracowaliśmy i scharakteryzowaliśmy przeciwciało monoklonalne (Anti-pC) specyficzne dla karboksyterminalnego propeptydu prokolagenu typu I. Continue reading „Przeciwciało monoklonalne do domeny karboksyterminalnej prokolagenu typu I wizualizuje fibroblasty syntetyzujące kolagen. Wykrywanie zmienionego fenotypu fibroblastów w płucach pacjentów ze zwłóknieniem płuc.”

Różnice etniczne polimorfizmu genu VH3 immunoglobuliny.

Gen linii płciowej VH26 zajmuje dwa różne loci, z powodu duplikacji genów i jest jednym z najczęściej wyrażanych genów VH ludzkiej immunoglobuliny. Raport ten identyfikuje allele każdego locus VH26 i opisuje różne wzorce polimorfizmu VH26 w trzech grupach etnicznych. Sondy oligonukleotydowe celujące w VH26 zastosowano w analizie RFLP specyficznej dla sekwencji DNA od 72 rasy kaukaskiej, 52 Azjatów, 35 amerykańskich Murzynów i członków sześciu rodzin. Locus A, w paśmie TaqI o masie 7,0 kb wykryto u 89% osób rasy kaukaskiej, 75% Azjatów i 26% czarnych (chi2 = P <0,0005). Odkryto, że locus B wykryty w paśmie 5,0 kb u niemal wszystkich osobników ma dodatkowe allele występujące przy 6,8 kb u 10% Azjatów i 3% u czarnych (chi2 = 7,8, P <0,02) i przy 3,7 kb w 1,4% rasy kaukaskiej, 21% Azjatów i (9% czarnych (chi2 = 13,8, P <0,001). Continue reading „Różnice etniczne polimorfizmu genu VH3 immunoglobuliny.”

Mechanizm toksyczności dezoksyadenozyny i 2-chlorodeoksyadenozyny w niedostępnych limfocytach ludzkich.

Dezoksyadenozyna jest uważana za toksyczny metabolit powodujący głęboką limfopenię u dzieci z niedoborem odporności z genetycznym niedoborem deaminazy adenozyny (ADA) oraz u dorosłych leczonych silnym inhibitorem ADA, deoksycoformycyny. Jednak biochemiczna podstawa toksyczności dezoksyadenozyny względem limfocytów pozostaje kontrowersyjna. W niniejszych doświadczeniach szczegółowo zbadano sekwencyjne zmiany metaboliczne indukowane w niedostępnych ludzkich limfocytach krwi obwodowej przez inkubację z deoksyadenozyną plus deoksykoformycyną lub 2-chlorodeoksyadenozyną (CdA), opornym na ADA kongenererem dezoksyadenozyny o właściwościach anty-białaczkowych i immunosupresyjnych. Leptotoksyczne działanie deoksyadenozyny i CdA wymagało ich fosforylacji i było hamowane przez deoksycytynę. Już w 4 godziny po ekspozycji na deoksynukleozydy, pęknięcia nici w DNA limfocytów zaczęły się akumulować, a synteza RNA uległa zmniejszeniu. Continue reading „Mechanizm toksyczności dezoksyadenozyny i 2-chlorodeoksyadenozyny w niedostępnych limfocytach ludzkich.”