Rola diestrów forbolu w tworzeniu kolonii mysich megakariocytów in vitro.

Różnicowanie megakariocytów in vitro jest regulowane przez dwie aktywności: aktywność stymulującą kolonię megakariocytów (Mk-CSA), która jest wymagana do proliferacji, oraz czynnik pomocniczy, aktywność wzmacniającą megakariocytów, która odgrywa rolę w późniejszych zdarzeniach różnicowania. Nowotworowe estry forbolu zmieniają wiele związanych z różnicowaniem komórek. W związku z tym wysunięto hipotezę, że estry forbolu mogą powodować różnicowanie megakariocytów in vitro. 4-octan beta-Phorbolu z 12-mirystynianem (PMA), w którym współhodowano ze źródłem Mk-CSA, stymulował trzykrotny wzrost liczby kolonii. Wspólna hodowla PMA i aktywność potencjatora megakariocytów nie stymulowała tworzenia kolonii, eliminując w ten sposób jakiekolwiek działanie PMA jako Mk-CSA. Continue reading „Rola diestrów forbolu w tworzeniu kolonii mysich megakariocytów in vitro.”

Hormon stymulujący tarczycę i insulinopodobny czynnik wzrostu-1 synergizują się w celu podniesienia 1,2-diacyloglicerolu w komórkach tarczycy szczura. Stymulacja syntezy DNA poprzez oddziaływanie między systemami transdukcji sygnału lipidów i cyklazy

Hormon tyreotropowy (TSH) i insulinopodobny czynnik wzrostu-1 (IGF-1) synergistycznie stymulują syntezę DNA w komórkach tarczycy. W tym raporcie nowy mechanizm pośredniczenia w tych synergistycznych interakcjach opisano w komórkach tarczycy szczura (FRTL-5). Ponieważ octan mirystynianu forbolu stymuluje syntezę DNA, zmierzono wpływ TSH, IGF-1 i insuliny na zawartość komórek FRTL-5 1,2-diacyloglicerolu (1,2-DG), endogennego aktywatora kinazy białkowej C. Po 6 dniach TSH, IGF-1 i insulina powodowały wzrost poziomu komórkowego 1,2-DG (średnia +/- SE) do 180 +/- 10%, 540 +/- 50% i 360 +/- 40% kontrola, podczas gdy TSH plus IGF-1 i TSH plus insulina synergistycznie zwiększały 1,2-DG do 1890 +/- 310% i 690 +/- 230%, odpowiednio. W przypadku braku insuliny wpływ TSH na podwyższenie poziomu 1,2-DG wykazywał wartość EC50 około 2000 mikroU / ml. Continue reading „Hormon stymulujący tarczycę i insulinopodobny czynnik wzrostu-1 synergizują się w celu podniesienia 1,2-diacyloglicerolu w komórkach tarczycy szczura. Stymulacja syntezy DNA poprzez oddziaływanie między systemami transdukcji sygnału lipidów i cyklazy”

Cyklaza adenylowa i interleukina 6 są dalszymi efektami parathormonu, powodującymi stymulację resorpcji kości.

Parathormon i inne czynniki resorpcyjne kości funkcjonują, przynajmniej częściowo, przez indukowanie osteoblastów do wydzielania cytokin, które stymulują zarówno różnicowanie, jak i resorpcyjną aktywność osteoklastów. Wcześniej zidentyfikowano dwie potencjalnie ważne cytokiny, wykazując, że parathormon indukuje ekspresję osteoblastów IL-6 i czynnik hamujący białaczkę bez wpływu na poziomy 14 innych cytokin. Chociaż parathormon aktywuje szlaki transdukcji wielu sygnałów, indukcja IL-6 i czynnik hamujący białaczkę zależy od aktywacji cyklazy adenylowej. Badanie to pokazuje, że cyklaza adenylowa jest również wymagana do stymulacji aktywności osteoklastów w hodowlach zawierających osteoklasty z kości szczurów o długiej długości i UMR106-01 komórek osteosarcoma podobnych do osteoblastów szczura. Ponieważ stymulacja parathormonem zarówno wytwarzania cytokin, jak i resorpcji kości zależy od tego samego szlaku transdukcji sygnału, postawiliśmy hipotezę, że IL-6 może być dalszym efektorem parathormonu. Continue reading „Cyklaza adenylowa i interleukina 6 są dalszymi efektami parathormonu, powodującymi stymulację resorpcji kości.”

Indukowana plazminą agregacja płytek i reakcja uwalniania płytek krwi. WPŁYW NA HEMOSTAZĘ

Aktywowana trypsyną plazmina świńska i ludzka plazmina aktywowana streptokinazą (SK) powodowała agregację zawiesiny przemytych płytek krwi ludzkiej, króliczej lub świńskiej. Agregacja płytek była odwracalna, ale towarzyszyło jej znaczące uwalnianie nukleotydów adeninowych, serotoniny i fibrynogenu płytkowego. W końcu strawiono fibrynogen płytkowy. Wpływ plazminy na płytki krwi był hamowany przez sojowy inhibitor trypsyny, kwas epsilon aminokapronowy, persantynę, prostaglandynę E1 i fenylobutazon. Krótkie traktowanie płytek krwi plazmidem zwiększyło ich wrażliwość na ADP; jednak ta czułość została utracona podczas dłuższej inkubacji z plazminą. Continue reading „Indukowana plazminą agregacja płytek i reakcja uwalniania płytek krwi. WPŁYW NA HEMOSTAZĘ”

Stymulacja cGMP monocytów przez dializaty leukocytów. Właściwość niezależnego od antygenu dializowanego czynnika transferu.

Zbadaliśmy wpływ dializatów na lizaty leukocytów zawierające dializowalną aktywność czynnika transferowego i inne dializaty leukocytów pozbawione aktywności czynnika transferu na akumulację cyklicznych nukleotydów w ludzkich leukocytach. Dializaty z normalnych leukocytów wytwarzały 4- do 11-krotny wzrost cGMP leukocytów, a eksperymenty z oczyszczonymi populacjami komórek ujawniły, że wzrosty były głównie, jeśli nie całkowicie, w monocytach krwi. Substancje, które zwiększyły cGMP monocytów można uzyskać z kilku populacji komórek, w tym komórek jednojądrzastych z gradientów Hypaque-Ficoll, monocytów przylegających do plastra, nieprzylegających limfocytów i neutrofili, ale nie były obecne w dializatach limfocytów białaczkowych od pacjentów z zespołem Sezary ego. Co więcej, dializaty, które zwiększały cGMP leukocytów, zasadniczo nie miały wpływu na wewnątrzkomórkowy cAMP. Dializaty zlizowanych komórek jednojądrzastych zawierały serotoninę, askorbinian i niezidentyfikowaną aktywność cholinergiczną, środki zwiększające cGMP leukocytów. Continue reading „Stymulacja cGMP monocytów przez dializaty leukocytów. Właściwość niezależnego od antygenu dializowanego czynnika transferu.”

Przewlekła hiperglikemia jest związana z upośledzonym wpływem glukozy na wydzielanie insuliny. Badanie na normalnych szczurach z zastosowaniem przewlekłych infuzji glukozy in vivo.

Zaproponowaliśmy, aby przewlekła hiperglikemia zmieniała zdolność glukozy do modulowania wydzielania insuliny, i teraz badali wpływ różnych poziomów hiperglikemii na funkcjonowanie komórek B u normalnych szczurów, stosując przewlekłe infuzje glukozy. Szczurom o masie 220-300 g podawano wlew 0,45% NaCl lub 20, 30, 35 lub 50% glukozy w dawce 2 ml / h przez 48 godzin, co zwiększało poziom glukozy w osoczu o 18 mg / dl dla 30% szczurów, 37 mg / dl u 35% szczurów i 224 mg / dl w grupie 50%. Następnie badano wydzielanie insuliny przy użyciu izolowanej perfuzji trzustki in vitro. Wydzielanie insuliny indukowane glukozą pozostawało nienaruszone w normoglikemicznych szczurach z 20% glukozą i było nasilone u szczurów z łagodną hiperglikemią i 30% glukozą. Jednakże, przy jeszcze większej hiperglikemii w grupie 35% glukozy, odpowiedź insulinowa na wysoki perfuzat glukozy była poważnie stępiona i została całkowicie utracona u większości hiperglikemicznych szczurów z 50% glukozą. Continue reading „Przewlekła hiperglikemia jest związana z upośledzonym wpływem glukozy na wydzielanie insuliny. Badanie na normalnych szczurach z zastosowaniem przewlekłych infuzji glukozy in vivo.”

Przeciwciało do reumatoidalnego zapalenia stawów Antygen jądrowy: JEJ ZWIĄZEK Z IN VIVO EPSTEIN-BARR ZAKAŻENIE WIRUSA

Większość pacjentów z seropozytywnym reumatoidalnym zapaleniem stawów i zmiennym, lecz mniejszym odsetkiem normalnych osobników, wytrąca przeciwciała przeciwko antygenowi jądrowemu, antygenowi jądrowemu reumatoidalnego zapalenia stawów, obecnemu w limfoblastoidalnych komórkach B limfocytów B Epstein-Barr. W badaniu pacjentów z mononukleozą zakaźną i zdrowych osób z grupy kontrolnej wykorzystaliśmy czuły test immunofluorescencji pośredniej na przeciwciała przeciwko reumatoidalnym antygenowi jądrowemu. Spośród 110 surowic od normalnych kadetów w wieku szkolnym 58 było od osób bez wcześniejszego zakażenia wirusem Epstein-Barr, o czym świadczy brak przeciwciał przeciwko wirusowemu antygenowi kapsydowemu. Wszystkie z nich również nie wykazywały aktywności wobec antygenu jądrowego reumatoidalnego zapalenia stawów. 52 surowice były dodatnie pod względem przeciwciał przeciwko wirusowemu antygenowi kapsydowemu, a przeciwciało przeciwko reumatoidalnym antygenowi jądrowemu występowało w 26 (50%) z nich. Continue reading „Przeciwciało do reumatoidalnego zapalenia stawów Antygen jądrowy: JEJ ZWIĄZEK Z IN VIVO EPSTEIN-BARR ZAKAŻENIE WIRUSA”

Przeciwciało monoklonalne do domeny karboksyterminalnej prokolagenu typu I wizualizuje fibroblasty syntetyzujące kolagen. Wykrywanie zmienionego fenotypu fibroblastów w płucach pacjentów ze zwłóknieniem płuc.

Nadmierne odkładanie kolagenu odgrywa kluczową rolę w rozwoju zwłóknienia, a wczesne lub aktywne zwłóknienie może być bardziej podatne na interwencję terapeutyczną niż późniejsze etapy powstawania blizn. Jednakże obecnie nie ma prostej metody oceny aktywności syntezy kolagenu i sekrecji fibroblastów w tkankach ludzkich. Karboksyterminalne domeny prokolonu typu I są usuwane proteolitycznie podczas wydzielania kolagenu. W związku z tym przeciwciała przeciwko tym domenom powinny zabarwić fibroblasty syntetyzujące kolagen typu I, ale nie pozakomórkowe włókienka kolagenowe, które mogłyby maskować sygnał z komórek. Opracowaliśmy i scharakteryzowaliśmy przeciwciało monoklonalne (Anti-pC) specyficzne dla karboksyterminalnego propeptydu prokolagenu typu I. Continue reading „Przeciwciało monoklonalne do domeny karboksyterminalnej prokolagenu typu I wizualizuje fibroblasty syntetyzujące kolagen. Wykrywanie zmienionego fenotypu fibroblastów w płucach pacjentów ze zwłóknieniem płuc.”

Różnice etniczne polimorfizmu genu VH3 immunoglobuliny.

Gen linii płciowej VH26 zajmuje dwa różne loci, z powodu duplikacji genów i jest jednym z najczęściej wyrażanych genów VH ludzkiej immunoglobuliny. Raport ten identyfikuje allele każdego locus VH26 i opisuje różne wzorce polimorfizmu VH26 w trzech grupach etnicznych. Sondy oligonukleotydowe celujące w VH26 zastosowano w analizie RFLP specyficznej dla sekwencji DNA od 72 rasy kaukaskiej, 52 Azjatów, 35 amerykańskich Murzynów i członków sześciu rodzin. Locus A, w paśmie TaqI o masie 7,0 kb wykryto u 89% osób rasy kaukaskiej, 75% Azjatów i 26% czarnych (chi2 = P <0,0005). Odkryto, że locus B wykryty w paśmie 5,0 kb u niemal wszystkich osobników ma dodatkowe allele występujące przy 6,8 kb u 10% Azjatów i 3% u czarnych (chi2 = 7,8, P <0,02) i przy 3,7 kb w 1,4% rasy kaukaskiej, 21% Azjatów i (9% czarnych (chi2 = 13,8, P <0,001). Continue reading „Różnice etniczne polimorfizmu genu VH3 immunoglobuliny.”

Funkcja receptora czynnika wzrostu I w komórkach przysadki jest hamowana przez dominujący negatywny mutant.

Hybrydowe receptory badano w komórkach przysadki mózgowej szczura z nadekspresją receptorów ludzkiego typu dzikiego typu 950Tyr (WT) lub insulinopodobnego czynnika wzrostu (IGF-I) lub zmutowanych ludzkich receptorów IGF-I skróconych w pozycji 952 w regionie transbłonowym podjednostki beta (952STOP ). Wiązanie 125I-IGF-I było zwiększone zarówno w 950Tyr (WT) (14-krotnie) i skróconym ludzkim opornym transfektorem ludzkiego IGF-1 (952STOP) (50-krotnie), w porównaniu do nietransfekowanych komórek, które zawierały endogenne szczurze receptory IGF-I szczura . Znakowanie komórek metabolicznych, a następnie immunoprecypitacja monoklonalnymi przeciwciałami podjednostkowymi alfa i beta ujawniły obecność hybrydowych szczurzych / skróconych ludzkich receptorów, skróconych transfekowanych ludzkich receptorów i holotetramerów ludzkiego WT IGF-I. Oba zmutowane i hybrydowe receptory ulegały degradacji wolniej niż receptory 950Tyr (WT) (> 16 h). Pomimo znacznie zwiększonego wiązania liganda i przedłużonego okresu półtrwania receptora, transfektanty 952STOP nie przekazywały sygnału IGF-I w celu stłumienia hormonu wzrostu (GH). Continue reading „Funkcja receptora czynnika wzrostu I w komórkach przysadki jest hamowana przez dominujący negatywny mutant.”