Wysokie powinowactwo do receptorów lipoprotein w atypowej dysbetalipoproteinemii (hyperlipoproteinemia typu III).

Rodzinna dysbetalipoproteinemia (lub hiperlipoproteinemia typu III) charakteryzuje się obecnością nieprawidłowych, bogatych w estry cholesterolu beta-bardzo niskiej gęstości lipoprotein (beta-VLDL) w osoczu. Osobnicy z typową dysbetalipoproteinemią są homozygotyczni pod względem podstawienia aminokwasu w apolipoproteinie (apo) E przy reszcie 158 i mają wadliwe wiązanie apo-E zarówno pre-beta-VLDL, jak i beta-VLDL do apo-B, E (LDL) (lub LDL) receptory (1988. Chappell, DA, J. Clin, Invest 82: 628-639). Aby zrozumieć wpływ substytucji w apo-E w miejscach innych niż reszta 158, badano dziewięć osobników z dys-talu-lipoproteinemią (dys-beta), którzy byli homozygotyczni lub heterozygotyczni pod względem substytucji w apo-E w nietypowych miejscach. Continue reading „Wysokie powinowactwo do receptorów lipoprotein w atypowej dysbetalipoproteinemii (hyperlipoproteinemia typu III).”

Metabolizm cholesterolu nadnerczy u człowieka: II. Badania in vitro obejmujące porównanie syntezy cholesterolu nadnerczy z syntezą hormonów glukokortykosteroidowych

Syntezę cholesterolu nadnerczy, jego estryfikację i syntezę hormonów glukokortykosteroidowych badano in vitro na ludzkiej tkance nadnerczy. Stwierdzono, że synteza cholesterolu nadnerczy może być zwykle niewielka w zona. Fasciculata ,. szczególnie w porównaniu z syntezą hormonów glukokortykosteroidowych, że jest ona kilkakrotnie wyższa w zona. reticularis. Continue reading „Metabolizm cholesterolu nadnerczy u człowieka: II. Badania in vitro obejmujące porównanie syntezy cholesterolu nadnerczy z syntezą hormonów glukokortykosteroidowych”

Posttranslacyjna regulacja białka-4 wiążącego insulinopodobny czynnik wzrostu w normalnych i transformowanych ludzkich fibroblastach. Zależność od insulinopodobnego czynnika wzrostu i badania biologiczne.

Białko 4 wiążące insulinopodobny czynnik wzrostu (IGFBP-4) jest białkiem 24-26 kD ulegającym ekspresji w różnych typach komórek in vivo i in vitro. Traktowanie normalnych dorosłych ludzkich fibroblastów za pomocą 10 nM insulinopodobnego czynnika wzrostu II (IGF-II) przez 24 godziny spowodowało 85% spadek endogennego IGFBP-4, co oceniono za pomocą analizy western ligand blot kondycjonowanej pożywki. Inkubacja pożywki kondycjonowanej ludzką fibroblastami (HFCM) z IGF-II w warunkach bezkomórkowych doprowadziła do podobnej utraty IGFBP-4. Ten regulowany posttranslacyjnie spadek IGFBP-4 wydawał się wynikać z proteazy w HFCM: (a) Można temu zapobiegać za pomocą specyficznych inhibitorów proteazy lub inkubacji w temperaturze 4 ° C; (b) proteoliza rekombinowanego ludzkiego (rh) IGFBP-4 wymagała HFCM; (c) immunoblotting i znakowanie radioaktywne potwierdzają cięcie IGFBP-4 na fragmenty IGFBP-4 18- i 14-kD. Proteaza była specyficzna dla IGFBP-4 i była ściśle zależna od IGF dla aktywacji. Continue reading „Posttranslacyjna regulacja białka-4 wiążącego insulinopodobny czynnik wzrostu w normalnych i transformowanych ludzkich fibroblastach. Zależność od insulinopodobnego czynnika wzrostu i badania biologiczne.”

Badania nad toksynogenezą w Vibrio cholerae. III. Charakterystyka mutantów nietoksynogennych in vitro i zwierząt doświadczalnych.

Spontaniczne i chemicznie indukowane mutanty o obniżonej zdolności do wytwarzania enterotoksyny cholery (choleragen) jako białka pozakomórkowego wyizolowano ze szczepów Vibrio cholerae 569B Inaba, klasycznego wirusa cholery i 3083-2 Ogawa, El Vibrio. Dzięki jakościowemu i ilościowemu testowi immunologicznemu in vitro takie mutanty można było rozdzielić na różne klasy charakteryzujące się albo wytwarzaniem niewykrywalnego choleragenu (toksycznego minus), albo niewielkich ilości pozakomórkowego choleragenu, albo dużych ilości związanego z komórką cholestagenem, ale niewielkim zewnątrzkomórkowym choleragenem. . Analiza białek w stężonych supernatantach hodowli za pomocą elektroforezy w żelach poliakrylamidowych wykazała, że w hodowlach z toksycznie ujemnych szczepów brakowało białek z ruchliwością elektroforetyczną odpowiadających choleragenowi lub spontanicznie utworzonym toksoidom (choleragenoid). Noworodki królików zakażonych szczepami toks-ujemnymi pozostawały bezobjawowe lub miały łagodniejsze objawy niż króliki zakażone szczepami toksycznymi + rodzicielskimi. Continue reading „Badania nad toksynogenezą w Vibrio cholerae. III. Charakterystyka mutantów nietoksynogennych in vitro i zwierząt doświadczalnych.”

Mutacja argininy do histydyny w kodonie 311 genu C-erbA beta prowadzi do zmutowanego receptora hormonu tarczycy, który nie pośredniczy w dominującym negatywnym fenotypie.

Zbadaliśmy gen receptora beta hormonu tarczycy c-erbA w pokrewnym GH, z członkiem, pacjentem GH, który miał ciężką postać selektywnej oporności przysadki na hormony tarczycy (PRTH). U tego pacjenta wystąpił nienormalnie prawidłowy hormon stymulujący tyreotropinę, znacznie podwyższona poziom beztukroksy tyroksyny (T4) i całkowita trijodotyronina (T3) oraz kliniczna nadczynność tarczycy. Kompletną sekwencję kodującą c-erbA beta zbadano przez połączenie klonowania genomowego i cDNA dla pacjenta GH i jej nietkniętego ojca. Pojedyncza mutacja, przejście guaniny do adeniny w nukleotydzie 1232, została znaleziona w jednym allelu obu tych członków, zmieniając kodon 311 z argininy na histydynę. Ponadto pół-siostra chorego GH chowała również ten zmutowany allel i, podobnie jak ojciec, była klinicznie normalna. Continue reading „Mutacja argininy do histydyny w kodonie 311 genu C-erbA beta prowadzi do zmutowanego receptora hormonu tarczycy, który nie pośredniczy w dominującym negatywnym fenotypie.”

Wpływ ostrego i przewlekłego podawania wapnia na Reninę plazmową

Aby ocenić wpływ Ca ++ na uwalnianie reniny, zmierzono aktywność reninową osocza (PRA) po ostrym i przewlekłym podawaniu Ca ++. 1% CaCl2 podano w jednej nerkowej tętnicy u 10 znieczulonych psów (0,3 mg / kg / min). Wydalona frakcja przefiltrowanego wapnia (EFca ++) i EFNa + z infuzji nerek była podwyższona (P <0,04) podczas trzech kolejnych 15-minutowych okresów infuzji. Stężenie wapnia w surowicy było znacząco podwyższone (P <0,001). Klirens kreatyniny, ogólnoustrojowe ciśnienie tętnicze i nerkowy przepływ krwi nie uległy zmianie (P> 0,10). Continue reading „Wpływ ostrego i przewlekłego podawania wapnia na Reninę plazmową”

Synteza transferryny przez drobnokomórkowe komórki raka płuca działa jako autokrynny regulator proliferacji komórkowej.

Ponieważ transferyna jest niezbędna do proliferacji komórkowej, badaliśmy syntezę transferryny przez linię komórek drobnokomórkowego raka płuc (NCI-H510), która przeżywa w pożywce bez surowicy bez dodatku transferyny. Testy immunologiczne dla ludzkiej transferryny wykazały, że te komórki zawierają immunoreaktywną ludzką transferynę. Badania immunofluorescencji wykazały, że białko ulega ekspresji na powierzchni komórek, przypuszczalnie wiąże się z receptorem transferyny. Pożywki kondycjonowane przez komórki NCI-H510 wspierają proliferację ludzkich komórek białaczkowych, które nie przeżyłyby w mediach bez transferyny. [35S] Wbudowana metionina dokumentacja syntezy transferryny przez komórki NCI-H510, a także trzy inne małe linie komórkowe. Continue reading „Synteza transferryny przez drobnokomórkowe komórki raka płuca działa jako autokrynny regulator proliferacji komórkowej.”

Zachowanie leukocytów eozynofilowych w ostrym zapaleniu. I. Brak zależności od funkcji nadnerczy.

Ostrej infekcji towarzyszy charakterystyczna redukcja krążących eozynofili. W badaniu tym zbadano ogólnie przyjęte założenie, że eozynopenia infekcji jest przejawem stymulacji nadnerczowej. Włośnica, odleżyny Escherichia coli i wczesny podskórny ropień pneumokokowy były stosowane jako infekcje doświadczalne o ograniczonym stopniu nasilenia. Włośnica wiąże się z eozynofilią, ale odmiedniczkowe zapalenie nerek i zakażenie pneumokokowe powodują eozynopenię. Opracowano test na kortykosteron w surowicy, który jest dostatecznie czuły, aby można go było przeprowadzić z małymi objętościami krwi uzyskanej sekwencyjnie od poszczególnych myszy. Continue reading „Zachowanie leukocytów eozynofilowych w ostrym zapaleniu. I. Brak zależności od funkcji nadnerczy.”

Zmniejszona obfitość informacyjnego RNA receptora beta 1 w upadającym ludzkim sercu.

Niewydolność serca u ludzi charakteryzuje się zmianami w transdukcji sygnałowej adrenergicznej mięśnia sercowego, z których najważniejszym jest regulacja w dół receptorów beta 1-adrenergicznych. Testowaliśmy hipotezę, że regulacja w dół receptorów beta 1-adrenergicznych w niewydolnym sercu ludzkim jest związana ze zmniejszonym poziomem mRNA receptora beta w stanie stacjonarnym. Ze względu na wyjątkowo małą liczebność mRNA receptora beta 1, pomiary były możliwe tylko w wyniku ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy (QPCR) lub metodami ochrony przed RNazą. Ponieważ gen receptora beta jest bez intronu, a obfitość mRNA receptora beta jest niska, QPCR spowodowało amplifikację genomową w całkowitym RNA, a pomiary mRNA musiały być wykonane w RNA wzbogaconym w poli (A) (+). Według QPCR stężenie mRNA receptora beta wahało się od 0,34 do 7,8 x 10 (7) cząsteczek / mikrograma wzbogaconego RNA poli (A) (+), a test był wrażliwy na 16,7 zeptomolu. Continue reading „Zmniejszona obfitość informacyjnego RNA receptora beta 1 w upadającym ludzkim sercu.”

Mechanizm toksyczności dezoksyadenozyny i 2-chlorodeoksyadenozyny w niedostępnych limfocytach ludzkich.

Dezoksyadenozyna jest uważana za toksyczny metabolit powodujący głęboką limfopenię u dzieci z niedoborem odporności z genetycznym niedoborem deaminazy adenozyny (ADA) oraz u dorosłych leczonych silnym inhibitorem ADA, deoksycoformycyny. Jednak biochemiczna podstawa toksyczności dezoksyadenozyny względem limfocytów pozostaje kontrowersyjna. W niniejszych doświadczeniach szczegółowo zbadano sekwencyjne zmiany metaboliczne indukowane w niedostępnych ludzkich limfocytach krwi obwodowej przez inkubację z deoksyadenozyną plus deoksykoformycyną lub 2-chlorodeoksyadenozyną (CdA), opornym na ADA kongenererem dezoksyadenozyny o właściwościach anty-białaczkowych i immunosupresyjnych. Leptotoksyczne działanie deoksyadenozyny i CdA wymagało ich fosforylacji i było hamowane przez deoksycytynę. Już w 4 godziny po ekspozycji na deoksynukleozydy, pęknięcia nici w DNA limfocytów zaczęły się akumulować, a synteza RNA uległa zmniejszeniu. Continue reading „Mechanizm toksyczności dezoksyadenozyny i 2-chlorodeoksyadenozyny w niedostępnych limfocytach ludzkich.”